Hướng dẫn toàn diện về kính hiển vi ánh sáng - Cách sử dụng kính hiển vi ánh sáng

Kính hiển vi ánh sáng là một công cụ cơ bản trong lĩnh vực sinh học và nhiều ngành khoa học khác. Nó cho phép các nhà khoa học hình dung và nghiên cứu các chi tiết phức tạp của các mẫu vật sinh học ở cấp độ tế bào và dưới tế bào. Bằng cách khai thác các tính chất của ánh sáng, các kỹ thuật kính hiển vi ánh sáng đã cách mạng hóa sự hiểu biết của chúng ta về thế giới siêu nhỏ.

Một kính hiển vi ánh sáng, còn được gọi là kính hiển vi quang học, là một công cụ khoa học sử dụng ánh sáng có thể nhìn thấy để quan sát và phóng đại các mẫu ở cấp độ hiển vi. Đây là một trong những công cụ được sử dụng rộng rãi nhất trong nghiên cứu sinh học, cho phép các nhà khoa học nghiên cứu các cấu trúc và chức năng của các tế bào, mô và các thực thể siêu nhỏ khác.

Nguyên tắc cơ bản đằng sau kính hiển vi ánh sáng liên quan đến việc truyền ánh sáng qua một mẫu và chụp ảnh kết quả. Thiết bị này bao gồm một số thành phần chính, bao gồm nguồn sáng, ống kính ngưng tụ, ống kính khách quan, thị kính và một giai đoạn để giữ mẫu vật.

Nguồn sáng, thường là đèn halogen hoặc đèn LED, phát ra ánh sáng đi qua ống kính ngưng tụ. Ống kính ngưng tụ tập trung và hướng ánh sáng vào mẫu, chiếu sáng nó. Ánh sáng sau đó tương tác với mẫu, trải qua các tương tác khác nhau như hấp thụ, tán xạ và phản xạ, tùy thuộc vào bản chất của mẫu vật.

Ống kính khách quan, được định vị gần mẫu, thu thập ánh sáng đã tương tác với mẫu vật. Nó phóng đại và tạo thành một hình ảnh thực, thực của mẫu vật. Thị giác, hoặc ống kính mắt, càng phóng to hình ảnh và cho phép người quan sát xem nó. Bằng cách kết hợp độ phóng đại của ống kính khách quan và thị kính, độ phóng đại tổng thể của hình ảnh được xác định.

Kính hiển vi ánh sáng có thể tạo ra một loạt các độ phóng đại, thường dao động từ 40x đến 1000x hoặc thậm chí cao hơn với các mục tiêu chuyên dụng. Ngoài ra, chúng có thể được trang bị các loại mục tiêu khác nhau để đạt được các khả năng hình ảnh khác nhau, chẳng hạn như độ phân giải cao, khoảng cách làm việc dài hoặc kỹ thuật tương phản chuyên dụng.

Một trong những lợi thế chính của kính hiển vi ánh sáng là tính linh hoạt của nó. Nó cho phép các nhà nghiên cứu quan sát các mẫu trong thời gian thực, cung cấp thông tin động về các quá trình và tương tác của tế bào. Hơn nữa, các kỹ thuật kính hiển vi ánh sáng có thể được kết hợp với các phương pháp nhuộm khác nhau, dán nhãn miễn dịch và đầu dò huỳnh quang để tăng cường độ tương phản và hiển thị có chọn lọc các thành phần cụ thể trong mẫu.

Trong khi kính hiển vi ánh sáng vượt trội trong các mẫu hình ảnh trong suốt và nhuộm màu, nó có những hạn chế. Sức mạnh giải quyết, hoặc khả năng phân biệt hai đối tượng cách nhau gần như các thực thể riêng biệt, bị giới hạn bởi bước sóng của ánh sáng nhìn thấy. Điều này hạn chế mức độ chi tiết có thể được giải quyết, đặc biệt đối với các cấu trúc nhỏ hơn khoảng 200 nanomet.

Tuy nhiên, những tiến bộ trong kính hiển vi ánh sáng, chẳng hạn như sự phát triển của các kỹ thuật siêu phân giải như kính hiển vi suy giảm phát xạ kích thích (STED) và kính hiển vi chiếu sáng có cấu trúc (SIM), đã đẩy các giới hạn độ phân giải, cho phép các nhà nghiên cứu hình dung cấu trúc dưới dạng và phức hợp phân tử với chi tiết lớn hơn.

Kính hiển vi ánh sáng được sử dụng cho một loạt các ứng dụng trên các ngành khoa học khác nhau. Dưới đây là một số cách sử dụng chính của kính hiển vi ánh sáng:
Nghiên cứu sinh học:Kính hiển vi ánh sáng được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu sinh học để nghiên cứu các tế bào, mô và sinh vật. Chúng cho phép các nhà nghiên cứu trực quan hóa và điều tra các cấu trúc tế bào, quá trình tế bào và tương tác. Kính hiển vi ánh sáng là rất quan trọng trong các lĩnh vực như sinh học tế bào, sinh học phát triển, vi sinh và mô học.

Chẩn đoán y tế:Kính hiển vi ánh sáng đóng một vai trò quan trọng trong chẩn đoán y tế. Chúng được sử dụng để kiểm tra các mẫu máu, dịch cơ thể và sinh thiết mô để xác định các tế bào bất thường, mầm bệnh và các thay đổi liên quan đến bệnh khác. Kính hiển vi ánh sáng rất cần thiết trong các lĩnh vực như bệnh lý, huyết học, vi sinh và tế bào học.

Giáo dục:Kính hiển vi ánh sáng được sử dụng rộng rãi trong các môi trường giáo dục để dạy học sinh về các cấu trúc tế bào và thế giới siêu nhỏ. Họ được tuyển dụng trong các trường học, cao đẳng và đại học để giúp sinh viên hiểu sinh học, giải phẫu và các ngành khoa học đời sống khác.

Kiểm soát chất lượng và các ứng dụng công nghiệp:Kính hiển vi ánh sáng được sử dụng trong các ngành công nghiệp cho mục đích kiểm soát và kiểm tra chất lượng. Chúng có thể được sử dụng để kiểm tra chất lượng và tính toàn vẹn của vật liệu, phân tích cấu trúc bề mặt, đo kích thước hạt và kiểm tra các quy trình sản xuất.

Khoa học pháp y:Kính hiển vi ánh sáng được sử dụng trong các phòng thí nghiệm pháp y để phân tích bằng chứng theo dõi như sợi, tóc, máu và dấu vân tay. Chúng cho phép các nhà khoa học pháp y xác định và so sánh các đặc điểm kính hiển vi, hỗ trợ trong các cuộc điều tra tội phạm và tố tụng pháp lý.

Khoa học vật chất:Kính hiển vi ánh sáng được sử dụng trong khoa học vật liệu để phân tích cấu trúc vi mô của vật liệu. Nó giúp các nhà nghiên cứu hiểu các tính chất, thành phần và khiếm khuyết của vật liệu ở cấp độ vi mô. Thông tin này là rất quan trọng để phát triển các vật liệu mới và cải thiện các vật liệu hiện có.

Khoa học môi trường:Kính hiển vi ánh sáng được sử dụng trong khoa học môi trường để phân tích các mẫu đất, mẫu nước và mẫu sinh học từ các hệ sinh thái. Họ hỗ trợ nghiên cứu các vi sinh vật, chất ô nhiễm và tương tác sinh thái, cung cấp hiểu biết về sức khỏe và bảo tồn môi trường.

Bảo tồn nghệ thuật:Kính hiển vi ánh sáng tìm ứng dụng trong bảo tồn và phục hồi nghệ thuật. Chúng được sử dụng để phân tích các sắc tố, nghiên cứu các lớp sơn, xác định tính xác thực và kiểm tra tình trạng của tác phẩm nghệ thuật. Điều này hỗ trợ trong việc bảo tồn và khôi phục các hiện vật văn hóa có giá trị.

Công nghệ nano:Kính hiển vi ánh sáng đóng một vai trò trong nghiên cứu công nghệ nano, cho phép các nhà khoa học hình dung và điều khiển cấu trúc nano. Các kỹ thuật như kính hiển vi quang học quét trường gần (NSOM) và kính hiển vi siêu phân giải góp phần vào sự hiểu biết và phát triển của vật liệu nano và nanodevices.

Thiên văn học:Kính hiển vi ánh sáng, đặc biệt là các biến thể chuyên dụng như kính hiển vi nhiễu, có thể được sử dụng trong thiên văn học để nghiên cứu các bề mặt của các vật thể thiên thể, như mặt trăng và các hành tinh khác. Họ hỗ trợ phân tích các đặc điểm địa chất và tiến hành hành tinh so sánh.
Đây chỉ là một vài ví dụ về các ứng dụng đa dạng của kính hiển vi ánh sáng. Tính linh hoạt và khả năng tiếp cận của kính hiển vi ánh sáng làm cho nó trở thành một công cụ có giá trị trong nhiều ngành khoa học, tạo điều kiện cho những khám phá, tiến bộ và ứng dụng thực tế trong các lĩnh vực nghiên cứu khác nhau.
 

Kính hiển vi trường sáng
Kính hiển vi trường sáng là dạng kính hiển vi ánh sáng phổ biến và đơn giản nhất. Nó sử dụng một nguồn sáng bên dưới mẫu, chiếu sáng mẫu vật và hình ảnh kết quả được hình thành bởi độ tương phản giữa mẫu vật và môi trường xung quanh. Kỹ thuật này được sử dụng rộng rãi để quan sát các mẫu sắc tố nhuộm màu hoặc tự nhiên, chẳng hạn như tế bào hoặc mô.

Kính hiển vi trường tối
Kính hiển vi trường tối là một kỹ thuật giúp tăng cường độ tương phản của các mẫu trong suốt hoặc không có. Nó liên quan đến việc chiếu sáng mẫu vật bằng ánh sáng xiên hoặc rải rác, dẫn đến một hình ảnh sáng của mẫu vật trên nền tối. Phương pháp này đặc biệt hữu ích để quan sát các vi sinh vật sống, không có chất, chẳng hạn như vi khuẩn hoặc động vật nguyên sinh nhỏ.

Kính hiển vi tương phản pha
Kính hiển vi tương phản pha chuyển đổi sự khác biệt trong chỉ số khúc xạ của mẫu vật thành độ tương phản, làm cho các mẫu trong suốt trở nên rõ ràng hơn. Nó sử dụng một thiết bị ngưng tụ chuyên dụng và ống kính khách quan để tạo ra sự thay đổi pha trong ánh sáng đi qua các phần khác nhau của mẫu vật. Kỹ thuật này thường được sử dụng trong sinh học tế bào để quan sát các tế bào sống trong nuôi cấy.

Kính hiển vi tương phản nhiễu khác biệt (DIC)
Kính hiển vi tương phản nhiễu khác biệt, còn được gọi là độ tương phản nhiễu của người Nomarski hoặc đơn giản là kính hiển vi DIC, là một kỹ thuật hình ảnh quang học giúp tăng cường độ tương phản trong các mẫu không có. Nó sử dụng ánh sáng phân cực và một lăng kính chuyên dụng để tạo ra sự xuất hiện giống như 3D của mẫu vật, tăng cường các chi tiết và cấu trúc. Kính hiển vi DIC đặc biệt hữu ích để quan sát các mẫu vật trong suốt như tế bào sống và mô.
 

Kính hiển vi ánh sáng phân cực
Kính hiển vi ánh sáng phân cực sử dụng ánh sáng phân cực để kiểm tra các mẫu có đặc tính dị hướng, có nghĩa là chúng tương tác khác nhau với sóng ánh sáng theo các hướng khác nhau. Bằng cách xoay các phân cực và phân tích cách ánh sáng tương tác với mẫu, kính hiển vi ánh sáng phân cực có thể cung cấp thông tin về các cấu trúc tinh thể, vật liệu lưỡng chiết và nhận dạng khoáng chất.

Kính hiển vi huỳnh quang
Kính hiển vi huỳnh quang liên quan đến việc sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang hoặc các phân tử được dán nhãn huỳnh quang để hình dung các cấu trúc hoặc phân tử cụ thể trong một mẫu. Nó sử dụng một nguồn sáng kích thích các phân tử huỳnh quang, khiến chúng phát ra ánh sáng của bước sóng dài hơn. Kỹ thuật này được sử dụng rộng rãi trong sinh học tế bào, miễn dịch học và sinh học phân tử để nghiên cứu các thành phần và quá trình tế bào.
 

Kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang
Kính hiển vi miễn dịch huỳnh quang là một ứng dụng chuyên dụng của kính hiển vi huỳnh quang kết hợp tính đặc hiệu của các kháng thể với ghi nhãn huỳnh quang. Nó cho phép các nhà nghiên cứu hình dung và định vị các kháng nguyên cụ thể trong các tế bào hoặc mô. Kỹ thuật này được sử dụng rộng rãi trong nghiên cứu và chẩn đoán y sinh.

Kính hiển vi đồng tiêu
Kính hiển vi đồng tiêu sử dụng chùm tia laser tập trung và khẩu độ lỗ kim để tạo ra phần phân giải quang, phân giải quang cao của các mẫu. Bằng cách loại bỏ ánh sáng không tập trung, kính hiển vi đồng tiêu tạo ra hình ảnh sắc nét, chi tiết của các phần mỏng trong các mẫu vật dày hơn. Nó thường được sử dụng trong nghiên cứu sinh học để kiểm tra các cấu trúc tế bào và các quá trình động.

Kính hiển vi hai photon
Kính hiển vi hai photon là một kỹ thuật hình ảnh huỳnh quang tiên tiến sử dụng các photon có bước sóng dài hơn, năng lượng thấp hơn để kích thích các phân tử huỳnh quang. Nó cho phép hình ảnh mô sâu với tổn thương hình ảnh tối thiểu, làm cho nó phù hợp cho hình ảnh trực tiếp của các mẫu dày và thậm chí các sinh vật còn nguyên vẹn. Kính hiển vi hai photon được sử dụng rộng rãi trong khoa học thần kinh và sinh học phát triển.
 

Kính hiển vi tấm ánh sáng
Kính hiển vi tấm ánh sáng, còn được gọi là kính hiển vi chiếu sáng mặt phẳng chọn lọc (SPIM), chiếu sáng mẫu bằng một tấm ánh sáng mỏng vuông góc với trục hình ảnh. Bằng cách chụp ảnh từ bên cạnh, kỹ thuật này làm giảm độc tính quang và cung cấp hình ảnh 3D nhanh, độ phân giải cao, 3D của các mẫu vật lớn. Kính hiển vi tấm ánh sáng đặc biệt có giá trị để chụp ảnh phôi, cơ quan và sinh vật trong suốt.

Tổng số kính hiển vi huỳnh quang phản xạ bên trong (TIRF)
Tổng số kính hiển vi huỳnh quang phản xạ bên trong khai thác hiện tượng tổng phản xạ bên trong để chiếu sáng có chọn lọc và hình ảnh vùng gần bề mặt của các mẫu. Bằng cách sử dụng chùm ánh sáng góc góc cao, chỉ có fluorophores gần với bề mặt mẫu được kích thích và phát hiện, cung cấp độ phân giải không gian đặc biệt và giảm thiểu huỳnh quang nền.
 

Kính hiển vi mở rộng
Kính hiển vi mở rộng là một kỹ thuật tương đối mới giúp mở rộng các mẫu sinh học để đạt được hình ảnh độ phân giải cao hơn bằng kính hiển vi thông thường. Nó liên quan đến việc nhúng mẫu trong một ma trận polymer có thể sưng và sau đó mở rộng nó. Bằng cách mở rộng mẫu đồng đều, kính hiển vi mở rộng cho phép hình ảnh của các cấu trúc mịn với kính hiển vi giới hạn nhiễu xạ.

Các loại kỹ thuật kính hiển vi ánh sáng khác nhau này cung cấp cho các nhà nghiên cứu một loạt các công cụ để hình dung và nghiên cứu các mẫu ở các quy mô khác nhau, từ các tế bào và mô đến cấu trúc dưới tế bào và tương tác phân tử. Mỗi kỹ thuật có những điểm mạnh và ứng dụng riêng, cho phép các nhà khoa học đi sâu hơn vào những bí ẩn của cuộc sống.

Một kính hiển vi ánh sáng bao gồm một số phần thiết yếu, mỗi phần đóng một vai trò cụ thể trong hoạt động của thiết bị. Dưới đây là các thành phần chính của kính hiển vi ánh sáng điển hình:
Thị kính/mắt:Thị kính, còn được gọi là mắt, là ống kính gần nhất với mắt của người quan sát. Nó thường phóng đại hình ảnh được hình thành bởi ống kính khách quan và cho phép người quan sát xem mẫu vật. Thị giác thường có thể hoán đổi cho nhau và có thể thay đổi về độ phóng đại.

Ống kính khách quan:Các ống kính khách quan là một tập hợp các ống kính được định vị gần với mẫu vật. Họ thu thập và phóng đại ánh sáng đi qua mẫu, tạo ra một hình ảnh mở rộng. Kính hiển vi thường có nhiều ống kính khách quan với các công suất phóng đại khác nhau, chẳng hạn như 4x, 10x, 40x và 100x. Chúng thường được gắn trên một tháp pháo xoay, cho phép người dùng chuyển đổi giữa các mục tiêu một cách dễ dàng.

Sân khấu:Sân khấu là một nền tảng phẳng giữ mẫu vật được quan sát. Nó có thể bao gồm các clip hoặc các giai đoạn cơ học để bảo đảm mẫu vật tại chỗ. Giai đoạn có thể được di chuyển theo chiều dọc hoặc chiều ngang để định vị mẫu vật để kiểm tra. Một số kính hiển vi cũng có cơ chế điều khiển giai đoạn để di chuyển chính xác giai đoạn theo các hướng khác nhau.

CONDENSTER:Thiết bị ngưng tụ nằm bên dưới sân khấu và đóng một vai trò quan trọng trong việc tập trung ánh sáng vào mẫu vật. Nó bao gồm một loạt các ống kính tập trung và căn chỉnh nguồn sáng để cung cấp sự chiếu sáng đồng đều của mẫu vật. Thiết bị ngưng tụ thường có thể được điều chỉnh theo chiều cao hoặc kích thước khẩu độ để kiểm soát cường độ và góc của ánh sáng.

Nguồn chiếu sáng:Nguồn chiếu sáng cung cấp ánh sáng đi qua mẫu vật. Nó thường nằm trong đáy của kính hiển vi và có thể bao gồm đèn halogen, LED hoặc các nguồn ánh sáng khác. Sự chiếu sáng có thể được truyền qua mẫu (kính hiển vi ánh sáng truyền) hoặc hướng vào mẫu từ trên cao (kính hiển vi ánh sáng phản xạ).

Cơ hoành/iris:Cơ hoành, còn được gọi là IRIS, là một khẩu độ tròn nằm trong thiết bị ngưng tụ. Nó kiểm soát lượng ánh sáng đi qua mẫu vật. Bằng cách điều chỉnh cơ hoành, người dùng có thể điều chỉnh cường độ và độ tương phản của hình ảnh.

Núm tập trung:Kính hiển vi ánh sáng có hai núm lấy nét, một để điều chỉnh thô và cái còn lại để điều chỉnh tốt. Các núm này di chuyển các ống kính giai đoạn hoặc khách quan theo chiều dọc để đưa mẫu vật vào tiêu điểm sắc nét. Núm điều chỉnh thô được sử dụng ban đầu để đưa mẫu vật vào chế độ xem, trong khi núm điều chỉnh tốt cung cấp sự tập trung chính xác.

Ống cơ thể:Các ống cơ thể kết nối thị kính với ống kính khách quan. Nó chứa một loạt các ống kính làm tăng thêm và truyền hình ảnh từ mục tiêu đến thị kính. Trong một số kính hiển vi, ống cơ thể có thể được mở rộng hoặc nghiêng cho sự thoải mái của người dùng và định vị công thái học.

Cánh tay:Cánh tay là phần cong hoặc góc của kính hiển vi kết nối ống cơ thể với đế. Nó cung cấp hỗ trợ cấu trúc và cho phép người dùng mang và điều khiển kính hiển vi.

Căn cứ:Cơ sở của kính hiển vi phục vụ như một nền tảng ổn định hỗ trợ toàn bộ thiết bị. Nó thường chứa nguồn chiếu sáng, công tắc nguồn và điều khiển điện. Cơ sở giúp duy trì sự ổn định của kính hiển vi trong quá trình sử dụng.

Đây là các thành phần chính của kính hiển vi ánh sáng, mặc dù các tính năng và phụ kiện bổ sung có thể thay đổi tùy thuộc vào mô hình cụ thể và các ứng dụng dự định. Sự kết hợp của các phần này cho phép các nhà nghiên cứu và sinh viên khám phá thế giới siêu nhỏ và nghiên cứu các mẫu vật khác nhau với độ phóng đại và độ rõ ràng tăng cường.

Giải mã trong kính hiển vi ánh sáng là một kỹ thuật xử lý hình ảnh tính toán được sử dụng để tăng cường độ phân giải và độ trong của hình ảnh thu được từ kính hiển vi quang học. Nó đặc biệt có giá trị để cải thiện chất lượng hình ảnh bị ảnh hưởng bởi các yếu tố như quang sai quang học, độ sâu trường giới hạn và tán xạ ánh sáng.

Quá trình giải mã liên quan đến việc đảo ngược các tác động của sự suy giảm hình ảnh do hệ thống quang học gây ra và khôi phục hình ảnh ban đầu, sắc nét hơn. Nó dựa trên sự hiểu biết rằng hình ảnh được chụp bởi kính hiển vi là một sự kết hợp của mẫu vật thực với chức năng lan truyền điểm của kính hiển vi (PSF). PSF mô tả cách một nguồn một điểm xuất hiện dưới dạng hình ảnh sau khi đi qua hệ thống quang học của kính hiển vi.

Bằng cách áp dụng các thuật toán giải mã, có thể ước tính mẫu vật gốc từ hình ảnh mờ. Các phương pháp giải mã thường liên quan đến các tính toán toán học lặp đi lặp lại cố gắng tìm ra mẫu vật có khả năng nhất, khi được kết hợp với PSF của kính hiển vi, tạo ra một hình ảnh gần nhất với dữ liệu thu được.

Các thuật toán giải mã có thể được thực hiện thông qua các phương pháp toán học khác nhau, chẳng hạn như ước tính khả năng tối đa (MLE), thuật toán Richardson-Lucy hoặc giải mã Wiener. Các thuật toán này có tính đến các yếu tố như nhiễu, tỷ lệ tín hiệu trên tạp âm và các đặc tính của hệ thống kính hiển vi để tinh chỉnh mẫu vật ước tính.

Những lợi ích của việc giải mã trong kính hiển vi ánh sáng là rất nhiều. Nó có thể tăng cường độ phân giải và chi tiết, dẫn đến hình ảnh sắc nét hơn và chính xác hơn. Giải mã giúp giảm thiểu tác động của mờ quang, cho phép hình dung tốt hơn các cấu trúc tốt và các chi tiết dưới cơ thể. Nó cũng cải thiện khả năng phân biệt các cấu trúc chồng chéo, tăng độ chính xác của phân tích và đo lường định lượng.

Điều quan trọng cần lưu ý là giải mã có hiệu quả nhất khi được áp dụng cho các hình ảnh có được với các cài đặt phù hợp, chẳng hạn như cường độ tín hiệu đủ, thời gian phơi sáng tối ưu và quang hóa tối thiểu. Ngoài ra, giải mã có thể khuếch đại nhiễu và tạo tác có trong hình ảnh gốc, do đó các kỹ thuật giảm nhiễu và hiệu chuẩn thích hợp thường được sử dụng cùng với các thuật toán giải mã.

Giải mã đã trở thành một công cụ mạnh mẽ trong kính hiển vi hiện đại, đặc biệt là trong các kỹ thuật như kính hiển vi đồng tiêu, kính hiển vi huỳnh quang trường rộng và các phương pháp hình ảnh siêu phân giải khác. Nó cho phép các nhà nghiên cứu trích xuất thêm thông tin và có được hình ảnh chất lượng cao hơn, cuối cùng thúc đẩy sự hiểu biết của chúng ta về các cấu trúc sinh học, quá trình động và tương tác tế bào.

Bước 1:Kết nối kính hiển vi ánh sáng với nguồn điện, trừ khi sử dụng gương để chiếu sáng. Trong những trường hợp như vậy, chọn một vị trí có ánh sáng tự nhiên rộng rãi.
Bước 2:Xoay mũi quay vòng để căn chỉnh ống kính khách quan thấp nhất.
Bước 3:Chuẩn bị mẫu vật của bạn bằng cách đặt một lớp phủ để đảm bảo bảo vệ đúng trước khi gắn nó lên sân khấu.
Bước 4:Bảo vệ slide bằng các clip kim loại, đảm bảo mẫu vật được đặt ở giữa bên dưới ống kính khách quan thấp nhất.
Bước 5: Ngang hàng thị kính và điều chỉnh dần núm điều chỉnh thô để đưa mẫu vật của bạn vào tiêu điểm. Hãy thận trọng để tránh tiếp xúc giữa slide và ống kính.
Bước 6:Tối ưu hóa thiết bị ngưng tụ cho cường độ ánh sáng cao nhất. Điều chỉnh cơ hoành bên dưới giai đoạn nếu cần thiết, đặc biệt khi sử dụng mục tiêu công suất thấp.
Bước 7:Tiếp tục tinh chỉnh trọng tâm bằng cách thao túng nhẹ núm điều chỉnh tốt cho đến khi đạt được hình ảnh sắc nét của mẫu vật của bạn.
Bước 8:Kiểm tra kỹ lưỡng mẫu của bạn.
Bước 9:Khi kết thúc với mục tiêu công suất thấp nhất, hãy chuyển sang mục tiêu năng lượng trung bình và lấy nét điều chỉnh bằng cách sử dụng núm điều chỉnh tốt.
Bước 10:Sau khi tập trung, chuyển sang mục tiêu công suất cao để kiểm tra thêm.